سلام
ضمن
تشكّر از تمام همكاراني كه در كارگاه آموزشي الكتروفورز شركت نمودند، به اطّلاع مي
رساند در پي درخواست تعدادي از همكاراني كه موفق به شركت در اين كارگاه نشدند،
خلاصه اي از كارهاي انجام شده را در ذيل مي آوريم.
باشد
كه مورد استفاده همكاران عزيز قرار گيرد:
به طور
كلّي اين آزمايش در چهار مرحلة كلّي صورت مي گيرد:
1- استخراج و آماده سازي دي ان آ
- ابتدا دو قاشق
جوانه گندم (معادل دو گرم) را به همراه مقداري آب، داخل هاون چيني مي كوبيم تا
حالتي شبيه ماست پيدا كند.
- نصف قاشق(معادل يك گرم)نمك استخراج را در 20سي سي
آب حل كنيد.
- دو ماده ي فوق را در يك بشر با هم مخلوط كنيد.
- يك قاشق از پودر استخراج دي ان آ(معادل يك گرم)
در 20سي سي آب ريخته و هم مي زنيم و سپس آنرا به به مخلوط مرحله ي قبل اضافه كرده
و ماده ي حاصل را به مدت15 الي 20دقيقه در دماي 60 درجه به آرامي هم مي زنيم و سپس
آنرا 5دقيقه در آب يخ گذاشته و بازهم در همين حال هم مي زنيم.
- حالا مقداري از اين مخلوط را به لوله آزمايشي اضافه
مي كنيم تا لوله تا نيمه پر شود. حالا هم حجم همين مخلوط از كناره ي لوله به
آهستگي اتانول سرد(كه چند ساعت در فريزر نگهداري شده) اضافه مي كنيم. پس از حدود 5
دقيقه توده ي ابري شكلي متشكل از رشته هاي دي ان آ بين دوفاز تشكيل خواهد شد كه به
تدريج به سطح خواهد آمد. حالا با يك ميله ي فلزي تميز اين توده را برداشته و به
داخل يك ويال انتقال مي دهيم و 1سي سي آب به آن اضافه كرده و خوب هم مي زنيم تا
رشته هاي دي ان آ در آب حل شوند. اين نمونه را نگه مي داريم تا در مرحله ي بعد
استفاده كنيم.
2- آماده
سازي بافر الكتروفورز و ساخت ژل آگاروز
- براي ساخت محول الكتروفورز: مقدار 2سي سي از
بافر غليظ الكتروفورز را در 98 سي سي آب رقيق مي كنيم.
- براي ساخت ژل آگاروز: مقدار 2سي سي از بافر
غليظ الكتروفورز را در 98 سي سي آب رقيق مي كنيم و سپس پودر آگاروز رنگي را داخل
آن مي ريزيم و محلول را تا شفاف شدن كامل، بر روي حرارت ملايم هم ميزنيم.
- حالا ابتدا و انتهاي سيني مخصوص ژل را با چسب
نواري مسدود مي كنيم و ژل را داخل آن مي ريزيم تا پر شود و دندانه هاي شانه در ژل
قرار گرفته باشد. البته بايد حواسمان باشد كه قبل ريختن شانه در جاي خود مستقر
باشد و نيز سيني در يك سطح كاملا افقي قرار بگيرد. حالا صبر مي كنيم تا ژل خودش را
بگيرد يا به عبارت ديگر حال ژله اي پيدا كند.
- پس از سفت شدن ژل، چسبهاي ابتدا و انتهاي سيني
را با دقت كنده و سيني را به آرامي
برداشته و داخل جايگاه مخصوص در تانك الكتروفورز مي گذاريم.
- محول الكتروفورز را كه در مرحله ي قبل آماده
كرده ايم را داخل تانك مي ريزيم تا تقريبا 1سانتيمتر بالاتر از سطح ژل بيايد و سپس
شانه را به آرامي برمي داريم.
3- بارگيري نمونه هاي آماده شده درون ژل غوطه ور
در بافر
- حالا با كمك سرنگ
مخصوص و سرسمپلرهاي زرد رنگ به اندازه ي نصف حجم سر سمپلر، از محلول دي از آيي كه
قبلا تهيه كرده ايم بر مي داريم و به يك ويال جديد وارد مي كنيم و سپس يك فطره از
بافر بارگذاري را به آن اضافه مي كنيم و آن را تكان مي دهيم تا خوب با هم بياميزد.
حالا با يك سر سمپلر جديد از اين محلول برمي داريم و با دقت به داخل چاهكها ي ژل
تزريق مي كنيم تا در عمق چاهكها ته نشين شود.
4- روشن نمودن الكتروفورز و مشاهدة دي ان آ
دو سر سيم حاصل از منبع تغذيه ي الكتريسيته را به
جايگاه هاي مخصوص در ابتدا و انتهاي تانك طوري متصل مي كنيم كه سر منفي(كاتد) به
نزديك چاهكها و سر مثبت(آند) دور از چاهكها متصل شود. حالا در پوش تانك را گذاشته
و كليد منبع تغذيه را مي زنيم تا جريان برقرار شود. پس از حدود سي دقيقه نوار ها
در جايگاه خود مستقر شده و قابل مشاهده خواهند بود.(براي مشاهده ي بهتر ميتوان از
نورUV
استفاده كرد.)